WWW.DISUS.RU

БЕСПЛАТНАЯ НАУЧНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

 

Коррекция функционального состояния печени у кроликов и собак с использованием транскраниал ь ной электростимуляции

На правах рукописи






аксёнов алексей алексеевич





коррекция функционального состояния печени

у кроликов и собак с использованием

транскраниальной электростимуляции





03.00.13 – физиология




Автореферат

диссертации на соискание ученой степени

кандидата биологических наук






Белгород 2009

Работа выполнена в ФГОУ ВПО «Курская государственная

сельскохозяйственная академия имени профессора И.И. Иванова»

Научный руководитель: заслуженный ветеринарный врач РФ,

доктор биологических наук,

профессор Сеин Олег Борисович

Официальные оппоненты: доктор биологических наук,

профессор Кулаченко Владимир Петрович;

доктор биологических наук,

профессор Масалов Владимир Николаевич

Ведущая организация: ФГОУ ВПО «Воронежский государственный аграрный университет им. Глинки»

Защита состоится «____»_________2009 г. в «______» часов на заседании диссертационного совета Д 220.004.01 при ФГОУ ВПО «Белгородская государственная сельскохозяйственная академия» по адресу: 308503, Белгородская область, белгородский район, пос. Майский, ул. Вавилова, д.1. тел./факс 8(4722)39-22-62

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВПО Бел ГСХА

Автореферат разослан «_____»__________ 2009 г.

Ученый секретарь диссертационного совета,

кандидат биологических наук, доцент Ю.Н. Литвинов

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. В 90-х годах прошлого столетия в результате многолетних исследований, проведенных группой ученых во главе с доктором медицинских наук, лауреатом Государственной премии и премии Правительства РФ в области науки и техники, профессором В.П. Лебедевым, была показана возможность стимуляции защитных механизмов мозга посредством неинвазивного транскраниального воздействия электрическим током определенных параметров. Был установлен и доказан опиатный механизм этой стимуляции, изучена роль её серотонин- ергического, ГАМК-ергического и холинергического звеньев (В.П. Лебедев и др., 1998). В дальнейшем В.П. Лебедевым и сотр. были разработаны специальные модели аппаратов для проведения транскраниальной электростимуляции (ТЭС) под общим названием «Трансаир».

В настоящие время метод ТЭС широко используется в медицинской практике. Его применяют для нормализации психофизиологического статуса и снижения утомляемости (В.П. Лебедев и др., 2001; 2003; 2005), нормализации системной и региональной гемодинамики (О.С. Медведев и др., 2005), стимуляции неспецифической резистентности организма (А.В. Рубцовенко и др., 1998; Н.Л. Груцкевич и др., 2005).

В последние годы метод ТЭС привлек внимание и ветеринарных специалистов. В литературных источниках имеются сведения о применении ТЭС с целью регуляции половой функции у свиней (О.Б. Сеин, 1991; 1994; 2008), для лечения телят, больных диспепсией (М.В. Беседин, 1999; 2000) и анемией (Д.В. Скачков, 2007), кастрации самцов (Ю.В. Храмов, 1998), выполнении хирургических операций (Д.Ф. Давлетбердин и др., 2002), стимуляции функционального состояния желудка у свиней и овец (С.А. Кизилов, 2004; О.Б. Сеин и др., 2008). В то же время во всех этих работах авторы используют различные способы наложения электродов, параметры постоянного и импульсного тока, продолжительность и кратность ТЭС. Всё это свидетельствует о том, что метод ТЭС в практике ветеринарной медицины находится на стадии становления и требует дальнейшего изучения и производственных апробаций.

Что касается влияния ТЭС на функциональное состояние печени у животных, то сведения, встречающиеся в источниках литературы, не многочисленны и зачастую носят противоречивый характер. Поэтому требуются дополнительные исследования гепатокорректорных эффектов ТЭС с применением комплексных подходов.

Цель и задачи исследований. Учитывая вышеизложенное, целью настоящих исследований являлось изучение влияния ТЭС на морфофункциональное состояние печени у кроликов и собак в норме и при ее дисфункции. Исходя из этого, были поставлены следующие задачи:

1. Изучить физиологический статус у кроликов и собак при использовании разных режимов ТЭС;

2. Определить гематологические показатели, отражающие функциональную активность печени у кроликов и собак после ТЭС;

3. Выявить морфологические особенности печени у кроликов и собак после ТЭС;

4. Изучить биохимический статус у кроликов и собак при дисфункции печени и ТЭС;

5. Изучить морфологические особенности печени у кроликов и собак при дисфункции и после проведения ТЭС.

Научная новизна. На основании клинических, физиологических и морфологических исследований впервые проведён комплексный анализ многостороннего влияния ТЭС на морфофункциональное состояние печени в норме и при дисфункции. В ходе решения этого вопроса были изучены: клинические и гематологические показатели, отражающие функциональную активность печени; установлены изменения морфологической структуры печени у кроликов и собак в норме, при дисфункции и после применения ТЭС; подтверждена связь эффектов ТЭС с опиоидными системами организма.

Отличие результатов исследователей от результатов, полученных другими авторами, заключается в том, что на основании комплексных исследований, выполненных на двух видах животных, получены результаты, подтверждающие гомеостатическую направленность действий ТЭС.

Теоретическая и практическая новизна работы. Результаты комплексных исследований морфофункциональных особенностей печени у кроликов и собак после ТЭС дополняют существующие данные о роли антиноцицептивной системы и способах воздействия на неё неинвазивными методами.

На основании полученных данных разработан новый способ восстановления функциональной активности печени у собак при ее дисфункции.

Внедрение результатов исследований. Разработанный способ восстановления функциональной активности печени у собак используется в государственных и частных ветеринарных клиниках г. Курска, а также в учебном процессе на факультетах ветеринарной медицины в Курской ГСХА.

Материалы диссертационной работы вошли в рекомендации «Использование транскраниальной электростимуляции в практике ветеринарной медицины» (Курск, 2008).

Основные положения, выносимые на защиту:

1. При рекомендованных режимах ТЭС не оказывает отрицательного влияния на организм, переносится животными хорошо и вызывает повторяемые клинические эффекты, без побочных действий.

2. Результаты клинических, физиологических и морфологических исследований, которые отражают гепатокорректорные эффекты ТЭС.

3. Гепатокорректорные эффекты ТЭС, обусловленные эндорфинергическими механизмами, которые при введении налоксона уменьшаются и потенцируются ингибитором энкефалиназ D-фенилаланином.

4. Способ восстановления функциональной активности печени у собак с использованием ТЭС.

Апробация работы. Основные материалы диссертации доложены и обсуждены на:

- международной научно-практической конференции ветеринарных терапевтов и диагностов «Современные проблемы ветеринарной терапии и диагностики болезней животных» (Троицк, 2007);

- международной научно-производственной конференции «Проблемы сельскохозяйственного производства на современном этапе и пути их решения» (Белгород, 2007);

- международной научно-практической конференции «Научные проблемы производства продукции животноводства и улучшения ее качества» (Брянск, 2007);

- Всероссийской научно-практической конференции «Ветеринарная медицина – теория, практика и обучение» (Санкт-Петербург, 2007).

- международной конференции «Трансферт инновационных технологий в животноводстве» (Орел, 2008);

- международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы ветеринарной медицины», посвященной 125–летию образования ветеринарной службы в Курской области (Курск, 2008);

- Всероссийской научно-практической конференции «Актуальные проблемы развития животноводства и пути их решения», посвященной 55-летию образования зооинженерного факультета Курской ГСХА (Курск, 2008);

- международной научно-производственной конференции «Селекционно–технологические аспекты повышения продуктивности сельскохозяйственных животных в современных условиях аграрного производства», посвященной 25-летию кафедры частной зоотехнии, технологии производства и переработки продукции животноводства Брянской ГСХА (Брянск, 2008);

- международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы повышения эффективности агропромышленного комплекса» (Курск, 2008);

- научно-практических конференциях профессорско-преподавательского состава и аспирантов Курской ГСХА (2006 – 2008).

Публикации результатов исследований. По материалам работы опубликовано одиннадцать научных работ.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 137 страницах компьютерного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения результатов исследований, выводов, практических предложений, списка литературы и приложений. Текст иллюстрирован 10 таблицами и 25 рисунками. Список литературы включает 204 источника, в том числе 79 иностранных авторов.

2. Материал и методы исследований

Диссертационная работа выполнялась в условиях межкафедральной научно-исследовательской лаборатории факультета ветеринарной медицины, ветеринарной клиники и вивария Курской ГСХА в период 2005 – 2008 гг.

Лабораторные исследования проводили на кафедре терапии и акушерства, биохимического отдела больницы скорой медицинской помощи г. Курска, научно – исследовательской лаборатории Курской биофабрики.

Объектом исследования являлись кролики породы советская шиншилла и беспородные собаки, которые содержались в ветеринарной клинике и виварии. Кормили животных по рационам, сбалансированным по питательным, минеральным и витаминным компонентам.

Экспериментальная часть работы состояла из четырёх серий опытов.

Первая серия опытов была посвящена изучению влияния различных режимов ТЭС на физиологический статус у кроликов и собак. Для этого из каждого вида животных было сформировано по одной опытной группе. Первая группа включала кроликов (7 голов). Во вторую группу входили собаки (5 голов). ТЭС проводили с использованием аппаратов «Трансаир – 2» и «Трансаир – 3».

В период и после ТЭС за подопытными животными вели наблюдение, учитывали поведенческие реакции, определяли основные клинические показатели (температура тела, пульс, дыхание).

До ТЭС, а также через 30 и 60 мин после последнего сеанса электростимуляции у всех животных брали кровь, в которой определяли содержание общих гематологических показателей (СОЭ, гематокрит, эритроциты, лейкоциты, гемоглобин) и -эндорфина.

Вторая серия опытов предусматривала изучение функционального состояния печени у кроликов и собак после ТЭС. Для этого было сформировано по две группы соответственно каждому виду животных.

Первые группы кроликов (7 голов) и собак (5 голов) подвергались ТЭС трижды через день. Вторые группы соответственно были контрольными, им электростимуляция не проводилась.

Режим ТЭС как для кроликов, так и для собак предусматривал использование постоянного тока (3,5 мс) и импульсного тока, величина которого достигала 70 гЦ, длительность 3,5 мс, амплитуда 3,0 мА. Продолжительность сеанса составляла 30 минут.

У всех животных до и после окончания последнего сеанса ТЭС брали кровь. В крови определяли СОЭ, гематокрит, содержание эритроцитов, лейкоцитов, гемоглобина, общего белка, белковых фракций, свободных аминокислот, общих липидов, глюкозы, билирубина, АлАТ, АсАТ и ЩФ.

Третья серия опытов была посвящена изучению у кроликов и собак морфофункционального состояния печени при дисфункции и ТЭС.

Исследования проводили на тех же животных, которые участвовали во второй серии опытов, после 10 - суточного уравнительного периода.

У кроликов и собак первых (опытных) групп вызывали дисфункцию печени путём перорального введения четырёххлористого углерода в оливковом масле в течение 6 дней в дозе 1,0 мл/кг. При этом кроликов подвергали ТЭС в режиме, используемом во время проведения второй серии опытов. У контрольных кроликов и собак также вызывали экспериментально дисфункцию печени, как и у кроликов опытной группы, но ТЭС не проводили.

У всех подопытных кроликов и собак до начала эксперимента и непосредственно после его окончания брали кровь, в которой определяли те же компоненты, что и во второй серии опытов.

После взятия крови у кроликов их убивали и проводили отбор проб печени для гистологического анализа.

В четвертой серии опытов изучали гепатокорректорные эффекты ТЭС после введения антагониста опиоидных пептидов налоксона и ингибитора энкефалиназ D-фенилаланина.

Опыты проводили на двух группах собак по 5 голов в каждой с использованием метода периодов (за контроль брались показатели, полученные до начала эксперимента). Предварительно у всех животных экспериментально вызывали дисфункцию печени ранее описанным методом. ТЭС проводили в режиме, используемом во второй серии опытов.

Собакам первой группы перед каждым сеансом ТЭС вводили внутрибрюшинно налоксон в дозе 1,0 мг/кг дважды с интервалом 15 мин. Собакам второй группы за два часа перед сеансом ТЭС внутрибрюшинно вводили D-фенилаланин в дозе 300 мг/кг.

У всех подопытных животных брали кровь до начала эксперимента, а также через 12 и 24 час после последнего сеанса ТЭС. В крови определяли общие гематологические и биохимические показатели, отражающие функциональное состояние печени.

В ходе проведения экспериментов использовали комплекс методов, включающий клинические, гематологические, гистологические и биометрические исследования.

Клинические методы предусматривали определение у подопытных животных температуры тела, частоты пульса и дыхательных движений.

Гематологические методы. СОЭ определяли с использованием аппарата Панченкова, гематокрит - на микроцентрифуге Шкляра. Содержание эритроцитов, лейкоцитов, гемоглобина устанавливали общепринятыми методами (Клиническая лабораторная диагностика в ветеринарии – М., 1985). Содержание общего белка определяли на рефрактометре РЛУ-1, белковые фракции – методом электрофореза на мембранах «Владипор» МФАС-ОС-1 (сканирование электрофореограмм проводили на денситометре при длине волны 540 нм). Идентификацию свободных аминокислот в крови осуществляли методом ионообменной хроматографии на аминокислотном анализаторе KLA-3В фирмы «Hitachi». Содержание -эндорфина определяли иммуноферментным методом. Содержание глюкозы, общего билирубина, общих липидов, ферментативной активности АлАТ, АсАТ, ЩФ определяли с использованием наборов фирм «Лахема» и «Хуман».

Гистологические методы. Изготовление гистологических препаратов из тканей печени проводили по общепринятой схеме, включающей фиксацию материала, обезвоживание в спиртах возрастающей концентрации (50-100°) и ксилоле, заливку в парафин, приготовление и окрашивание срезов (Г.А. Меркулов, 1969; Д.С. Саркисов и др., 1996). Морфометрические измерения гистологических объектов осуществляли с использованием винтового окуляр–микрометра, фотосъемку гистопрепаратов проводили с применением микроскопа МБИ-15 и цифровой фотокамеры.

Гистологические исследования выполняли на кафедре терапии и акушерства Курской ГСХА и Курском областном бюро патологической анатомии.

Биометрические методы. Полученные в ходе проведения экспериментов данные подвергались биометрической обработке (П.Ф. Рокицкий, 1973) с использованием ПЭВМ.

3. Результаты исследований

3.1. Функциональная активность печени у кроликов

и собак после применения ТЭС

Целью данной серии опытов являлось исследование общих гематологических показателей, а также интерьерных показателей, отражающих функциональную активность печени у кроликов и собак, подвергавшихся ТЭС.

Результаты исследований представлены в таблице 1, из данных которой следует, что большинство изучаемых показателей, полученных до и после ТЭС, существенных различий не имело. Статистически достоверные различия были выявлены только в содержании эритроцитов, глюкозы, - и -глобулинов.

При идентификации свободных аминокислот, содержащихся в крови кроликов, было установлено, что преобладающее их большинство после ТЭС повысилось (гистидин, аргинин, треонин, пролин, аланин, валин, метионин, лейцин, тирозин, аспарагиновая и глютаминовая кислоты).

Таблица 1 - Гематологические показатели у кроликов и собак после проведения ТЭС

Показатели Кролики Собаки
До проведения ТЭС После проведения ТЭС До проведения ТЭС После проведения ТЭС
СОЭ, мм/ч 1,80±0,06 2,0±0,08 2,3±0,57 2,5±0,45
Гематокрит, % 38,8±5,11 40,5±6,17 42,0±5,85 45,5±4,76

Эритроциты, *1012/л 6,2±0,10 6,8±0,12* 5,8±0,09 6,5±0,07*

Лейкоциты, *109/л 7,1±0,73 6,7±0,56 8,7±0,45 9,3±0,57

Гемоглобин, г/л 108,0±7,80 111,5±8,40 135,6±8,9 144,0±10,3

Глюкоза, ммоль/л 2,8±0,17 3,4±0,19* 3,6±0,09 3,9±0,11*

Общие липиды, г/л 3,3±0,21 3,2±0,17 3,5±0,83 3,3±0,67

Билирубин общий, мкмоль/л 2,05±0,44 1,85±0,53 2,2±0,53 2,0±0,65

АлАТ, нмоль/с*л 136,6±15,4 129,4±14,0 140,5±11,2 129,0±10,5

АсАТ, нмоль/с*л 68,8±9,9 62,5±0,4 82,7±7,6 72,7±8,9

ЩФ, нмоль/с*л 424,5±47,2 454,0±52,6 489,0±38,8 466,5±41,5

Общий белок, г/л 68,5±6,40 69,9±5,04 63,5±4,20 65,9±3,80

Альбумины, % 59,8±4,70 60,5±5,30 52,5±4,75 53,4±4,00

-глобулины, % 12,5±0,95 10,7±0,88 14,5±0,66 12,0±0,42*

-глобулины, % 11,5±0,74 11,0±0,45 18,0±0,24 17,8±0,55

-глобулины, % 16,2±0,28 17,8±0,23* 15,0±0,22 16,8±0,18*

Примечание: * при р<0,05 по сравнению с показателями, полученными до проведения ТЭС

При этом достоверное увеличение (р<0,05) было только аргинина, треонина, метионина, тирозина, аспарагиновой и глютаминовой кислот. В то же время содержание лизина, серина, глицина, изолейцина и фенилаланина после ТЭС уменьшилось. Однако данное понижение было статистически недостоверным (р>0,05).

3.2. Гематологические показатели у кроликов и собак

с дисфункцией печени после проведения ТЭС

В данной серии опытов изучали интерьерные показатели у кроликов и собак при дисфункции печени и после проведения ТЭС. С этой целью у подопытных животных экспериментальным путем вызывали временное нарушение функциональной активности печени. У всех подопытных животных исследовали гематологические показатели до и после ТЭС.

В ходе проведенных исследований было установлено (табл. 2), что содержание большинства изучаемых показателей крови у животных с функциональным расстройством печени после ТЭС нормализовалось. При этом повышение содержания эритроцитов, глюкозы, общих липидов, ферментативной активности АсАТ и АлАТ после ТЭС

Таблица 2 - Гематологические показатели у кроликов и собак с дисфункцией печени после проведения ТЭС

Показатели Кролики Собаки
До проведения ТЭС После проведения ТЭС До проведения ТЭС После проведения ТЭС
СОЭ, мм/ч 2,2±0,19 1,8±0,18 3,3±0,40 2,9±0,45
Гематокрит, % 38,5±5,65 41,7±6,05 42,0±6,6 45,4±5,8
Эритроциты, *1012/л 5,9±0,08 6,8±0,11* 5,7±0,11 6,0±0,09*
Лейкоциты, *109/л 8,4±0,92 7,2±0,85 9,1±0,14 8,5±0,22*
Гемоглобин, г/л 108,0±10,9 129,0±12,4 120,8±7,9 135,5±9,8
Глюкоза, ммоль/л 2,85±0,15 3,25±0,20* 3,0±0,08 3,4±0,10*
Общие липиды, г/л 3,0±0,16 3,2±0,11* 3,1±0,12 3,4±0,20*
Билирубин общий, мкмоль/л 3,05±0,27 2,08±0,24* 3,6±0,11 2,7±0,14*
АлАТ, нмоль/с*л 149,9±10,4 118,0±9,7* 189,5±13,3 150,8±15,4*
АсАТ, нмоль/с*л 88,5±8,2 63,7±7,4* 98,5±9,6 68,8±8,0*
ЩФ, нмоль/с*л 486,0±30,7 437,5±38,5 507,3±30,6 457,7±41,5
Общий белок, г/л 64,5±5,6 72,8±4,9 59,5±2,84 64,4±2,65
Альбумины, % 54,5±6,6 58,7±5,7 48,3±2,98 53,5±2,87
-глобулины, % 14,1±0,73 14,7±0,83 10,5±1,76 11,0±1,52
-глобулины, % 10,9±0,28 9,8±0,49* 24,9±2,93 22,8±2,34
-глобулины, % 20,5±1,05 16,8±1,17* 16,3±0,55 12,7±0,46*

Примечание: * при р<0,05 по сравнению с показателями, полученными до проведения ТЭС

и уменьшение содержания лейкоцитов (у собак), общего билирубина, -глобулинов (у кроликов) и -глобулинов было статистически достоверным (р<0,05). Исследование свободных аминокислот показало, что суммарное их содержание в крови подопытных животных с дисфункцией печени составляло 2,17±0,09 ммоль/л. При этом на долю незаменимых аминокислот приходилось 1,22±0,07 ммоль/л, а заменимых аминокислот – 0,95±0,12 ммоль/л. После проведения ТЭС содержание аминокислот повысилось соответственно до 2,50±0,11; 1,43±0,04 и 1,07±0,07 ммоль/л. Увеличение суммы аминокислот происходило за счет гистидина, метионина, аспарагиновой и глютаминовой аминокислот, увеличение содержания которых было достоверным (р<0,05). В то же время содержание треонина, серина, аланина, изолейцина и тирозина после ТЭС уменьшалось, однако данное уменьшение было статистически недостоверным (р>0,05).

Полученные результаты при проведении данной серии опытов свидетельствуют о том, что ТЭС обладает гепатокорректорными эффектами.

3.3. Морфологическая структура печени у кроликов

при её дисфункции и после ТЭС

При исследовании гистологической структуры печени у кроликов, которым ТЭС не проводили, у многих животных были выявлены изменения, которые у кроликов опытной группы не встречались. В частности в печени выявлялась ячеистая структура, в некоторых случаях отмечались расширения пространства Диссе. Имели место микроциркуляторные нарушения, центральные вены заполнены форменными элементами крови. В гепатоцитах уменьшалось количество гликогена, а количество жировых включений, наоборот, увеличивалось. При этом архитектоника балочной структуры гепатоцитов сохранялась и не отличалась от таковой у кроликов опытных групп.

Проведенные нами исследования указывают на то, что ТЭС повышает дезинтаксикационную функцию печени. Эффекты ТЭС, по-видимому, связаны с воздействием на опиоидные рецепторы, которые по данным М.И. Кузина (1984) и сотрудников обнаружены в печени. Не исключено, что опиоидные пептиды, в данном случае, выполняют триггерную роль. То есть «включают» механизмы, блокирующие образования свободных радикалов, которые образуются из четыреххлористого углерода с участием цитохромов. Именно эти свободные радикалы путем перекисного окисления повреждают фосфолипидные мембраны эндоплазматического ретикулума с образованием токсических продуктов, разрушающих гепатоциты. Однако не исключены и другие механизмы позитивного гепатотропного воздействия ТЭС.

Таким образом, проведённые нами гистологические исследования свидетельствуют о том, что ТЭС обладает гепатопротекторными свойствами и оказывает положительное влияние на морфофункциональное состояние печени при её дисфункции.

3.4. Функциональное состояние печени у собак при

дисфункции и после применения ТЭС в комплексе с налоксоном

Учитывая, что налоксон является антагонистом опиоидных пептидов, нами были проведены эксперименты по выяснению его влияния на гепатокорректорные эффекты ТЭС. С этой целью собакам перед электростимуляцией вводили внутрибрюшинно налоксон в дозе 1,0 мл/кг дважды с интервалом 15 мин. У всех животных брали кровь во время постановки их на опыт и в конце эксперимента. В крови определяли общие гематологические показатели и показатели, отражающие функциональную активность печени.

Анализ данных, представленных в таблице 3, свидетельствует о том, что у собак с дисфункцией печени после ТЭС изменения содержания изучаемых гематологических показателей не имели достоверных различий (р>0,05), за исключением содержания глюкозы и -глобулинов (р<0,05).

Таблица 3 - Гематологические показатели у собак с дисфункцией печени после введения

налоксона и проведения ТЭС

Показатели До начала эксперимента Через 12 час после ТЭС Через 24 час после ТЭС
СОЭ, мм/ч 3,4±0,12 3,4±0,14 3,30,16
Гематокрит, % 43,5±6,4 44,0±5,8 43,0±4,2
Эритроциты, *1012/л 5,6±0,18 5,7±0,22 5,5±0,30
Лейкоциты, *109/л 9,3±0,15 9,5±0,17 9,6±0,22
Гемоглобин, г/л 115,0±8,2 116,8±7,9 116,0±9,9
Глюкоза, ммоль/л 3,3±0,09 3,6±0,07* 3,5±0,15
Общие липиды, г/л 3,2±0,26 3,2±0,20 3,0±0,17*
Билирубин общий, мкмоль/л 3,8±0,17 3,8±0,18 3,7±0,16
АлАТ, нмоль/с*л 178,3±14,0 170,5±11,2 182,5±12,0
АсАТ, нмоль/с*л 89,6±8,7 88,0±7,3 85,5±9,8
ЩФ, нмоль/с*л 489,8±20,9 495,6±21,1 480,3±30,1
Общий белок, г/л 61,4±5,22 60,8±7,33 60,0±5,99
Альбумины, % 50,5±3,07 49,7±3,11 48,8±2,09
-глобулины, % 14,7±0,55 15,8±0,63 15,0±0,54
-глобулины, % 16,4±0,73 17,8±0,59 18,2±0,47*
-глобулины, % 18,4±0,82 18,7±0,74 18,0±0,48

Примечание: * - при р<0,05 по сравнению с соответствующими показателями, полученными до начала эксперимента

Таким образом, результаты проведенных исследований свидетельствуют о том, что гепатокорректорные эффекты ТЭС непосредственно связаны с антиноцицептивной системой мозга.

3.5. Функциональное состояние печени у собак при дисфункции и после применения ТЭС в комплексе с D-фенилаланином

Известно, что D-аминокислоты являются ингибиторами энкефалиназ, в частности карбоксипептидазы А, мембраносвязывающего фермента, расщепляющего преимущественно энкефалин. Учитывая это, нами были проведены эксперименты по изучению влияния D-фенилаланина на гепатокорректорные эффекты ТЭС.

Как свидетельствуют данные, представленные в таблице 4, у собак с дисфункцией печени после введения D-фенилаланина гепатокорректорные эффекты усиливались. Так, содержание эритроцитов, глюкозы, общего белка, -глобулинов, ферментативной активности АсАТ и АлАТ достоверно повысилось (р<0,05), а содержание лейкоцитов, общего билирубина и -глобулинов уменьшилось.

Полученные нами данные в этой серии опытов подтверждают участие эндогенных опиоидных пептидов в гепатокорректорных эффектах ТЭС.

Таблица 4 - Гематологические показатели у собак с дисфункцией печени после введения D-фенилаланина и проведения ТЭС

Показатели До начала эксперимента Через 12 час после ТЭС Через 24 час после ТЭС
СОЭ, мм/ч 3,2±0,08 3,0±0,05 3,0±0,07
Гематокрит, % 43,7±4,0 44,5±4,7 45,6±5,2
Эритроциты, *1012/л 5,4±0,15 5,8±0,17 6,3±0,12*
Лейкоциты, *109/л 8,6±0,12 8,0±0,14* 7,4±0,10*
Гемоглобин, г/л 118,5±8,0 125,0±8,7 133,0±10,0
Глюкоза, ммоль/л 2,8±0,07 3,0±0,06* 3,2±0,09*
Общие липиды, г/л 3,0±0,19 3,3±0,24 3,3±0,17
Билирубин общий, мкмоль/л 3,7±0,12 3,3±0,11* 3,0±0,17*
АлАТ, нмоль/с*л 178,5±10,2 167,5±11,6 148,0±9,7
АсАТ, нмоль/с*л 90,5±4,8 70,0±9,9 64,4±5,3*
ЩФ, нмоль/с*л 503,0±27,5 486,4±23,0 466,0±20,2
Общий белок, г/л 58,4±2,77 62,2±2,15 63,0±1,88
Альбумины, % 48,8±2,77 50,4±3,20 51,7±3,00
-глобулины, % 10,2±0,56 12,1±0,74 13,4±0,66
-глобулины, % 18,6±0,21 17,1±0,24 16,4±0,33*
-глобулины, % 22,4±0,33 20,4±0,69 18,5±0,38*

Примечание: *- при р<0,05 по сравнению с соответствующими показателями, полученными до начала эксперимента

3.6. Способ восстановления функциональной активности

печени у собак при ее дисфункции с использованием ТЭС

На основании результатов проведённых исследований гепатокорректорных эффектов ТЭС нами был разработан способ восстановления функциональной активности печени у собак при её дисфункции.

Способ включает применение ТЭС в комплексе с введением D-фенилаланина. С этой целью собакам с нарушением функциональной активности печени за 2 часа до начала сеанса электростимуляции вводят внутрибрюшинно D-фенилаланин в дозе 300 мг/кг. Затем проводят трижды через день ТЭС с использованием аппарата «Трансаир-2» или «Трансаир-3».

Для этого на голову собаки накладывают электроды в лобной (катод) и затылочной (анод) области. Между электродами и кожей головы помещают фетровые прокладки, смоченные водопроводной водой. Закрепляют электроды с помощью резинового фиксатора–оголовья.

При проведении ТЭС вначале на электроды подают постоянный ток, который медленно в течение двух минут увеличивают от 0 до 3,0 мА, затем на электроды в той же полярности подают прямоугольные импульсы с частотой 70 Гц и длительностью 3,5 мс, амплитуду которых медленно увеличивают в течение двух минут до 3,0 мА. Электростимуляцию проводят три раза через день. Продолжительность сеанса 30 минут.

Апробация способа была проведена на 10 собаках, у которых экспериментально вызывали дисфункцию печени путём скармливания четыреххлористого углерода. Экспериментальную дисфункцию печени и результаты применения ТЭС подтверждали путём проведения лабораторного анализа крови, в которой определяли компоненты, отражающие функциональную активность печени.

Результаты проведенных исследований представлены в таблице 5, из данных которой следует, что у собак с дисфункцией печени, которым проводили ТЭС, происходило восстановление ее функциональной активности. Так, у собак опытной группы после ТЭС показатели содержания глюкозы, билирубина общего, белка, общих липидов, ферментативной активности аминотрансфераз, ЩФ практически возвращались к фоновым значениям. У собак контрольной группы, которым ТЭС не проводили, исследуемые компоненты крови соответствовали таковым у собак до начала эксперимента.

Таким образом, применение разработанного нами способа позволяет нормализовать функциональную активность печени у собак. В связи с чем способ можно рекомендовать к использованию в практике ветеринарной медицины.

Таблица 5 - Гематологические показатели у собак при использовании ТЭС для восстановления функциональной активности печени при её дисфункции

Показатели До скармливания четырёххлористого углерода После скармливания четырёххлористого углерода После применения способа
опыт контроль опыт контроль опыт контроль
СОЭ, мм/час 2,2±0,66 2,0±0,59 3,3±0,11 3,1±0,12 3,0±0,14* 3,3±0,09
Гематокрит, % 43,0±4,4 42,5±6,8 44,5±5,0 44,8±6,7 45,4±5,7 44,3±6,2
Эритроциты, *1012/л 5,7±0,11 5,4±0,16 6,1±0,37 6,2±0,52 6,8±0,22* 6,0±0,34
Лейкоциты, *109/л 8,3±0,56 8,0±0,72 9,9±0,50 9,7±0,46 8,5±0,62 10,5±0,78
Гемоглобин, г/л 120,5±7,0 118,7±8,8 108,5±7,4 104,0±8,9 119,5±10,3 100,5±11,8
Глюкоза, ммоль/л 3,1±0,12 3,3±0,18 2,50±0,55 2,67±0,42 3,04±0,37* 2,75±0,40
Билирубин общий, мкмоль/л 2,1±0,42 2,0±0,68 3,7±0,15 3,6±0,21 3,1±0,16* 3,7±0,12
Общий белок, г/л 64,0±4,8 63,8±6,2 59,5±3,62 58,3±2,16 63,0±3,18 59,4±2,43
Общие липиды, г/л 3,6±0,31 3,4±0,26 3,0±0,28 2,9±0,24 3,3±0,19* 2,9±0,11
АлАТ, нмоль/с*л 144,0±14,2 138,6±13,4 205,3±11,3 197,8±10,2 150,0±10,4* 188,5±10,5
АсАТ, нмоль/с*л 67,0±9,2 70,5±8,4 118,3±14,2 109,2±12,5 69,8±9,0* 111,7±10,8
ЩФ, нмоль/с*л 476,5±30,8 484,5±37,2 516,5±24,0 508,5±29,5 430,2±25,5* 514,7±20,2

4. Выводы

1. ТЭС не оказывает отрицательного влияния на физиологический статус кроликов и собак и сопровождается активизацией антиноцицептивных механизмов мозга, о чем свидетельствует динамика содержания -эндорфина в крови подопытных животных, уровень которого через 30 мин после окончания сеанса ТЭС увеличивался у кроликов в 3,2 раза, а у собак – в 3,5 раза.

2. При нормальном состоянии печени у кроликов и собак ТЭС не оказывает выраженного влияния на её функциональную активность:

- у кроликов и собак после ТЭС изменения СОЭ, гематокрита, содержание в крови лейкоцитов, гемоглобина, билирубина, общих липидов, общего белка, белковых фракций, незаменимых и заменимых аминокислот, ферментативной активности аминотрансфераз и ЩФ находились в пределах физиологических норм и были статистически недостоверными (р>0,05) по сравнению с фоновыми показателями;

- повышение содержания в крови кроликов и собак эритроцитов, глюкозы, -глобулинов и уменьшение содержания у собак -глобулинов было статистически достоверным (р<0,05).

3. ТЭС обладает гепатокорректорным действием:

- у кроликов с дисфункцией печени после электростимуляции нормализовалось содержание в крови эритроцитов, глюкозы, билирубина, общих липидов, - и -глобулинов, а также ферментативная активность аминотрансфераз и ЩФ, при этом выявленные изменения были статистически достоверными (р<0,05);

- после электростимуляции у кроликов с дисфункцией печени повышалось в крови содержание лизина (на 0,01 ммоль/л), аргинина (на 0,08 ммоль/л), аспарагиновой кислоты (на 0,08 ммоль/л), серина (на 0,01 ммоль/л), глютаминовой кислоты (на 0,11 ммоль/л) и уменьшалось содержание аланина (на 0,09 ммоль/л);

- у собак с дисфункцией печени после электростимуляции нормализовалось содержание в крови эритроцитов, лейкоцитов, глюкозы, общего билирубина, -глобулинов, общих липидов, а также ферментативная активность аминотрансфераз и ЩФ, при этом выявленные изменения были статистически достоверными (р<0,05);

- после электростимуляции у собак с дисфункцией печени отмечалось достоверное повышение (р<0,05) в крови гистидина (на 0,09 ммоль/л), аспарагиновой кислоты (на 0,08 ммоль/л), глютаминовой кислоты (на 0,03 ммоль/л), метионина (на 0,07 ммоль/л).

4. ТЭС оказывает положительное действие на морфологическую структуру печени:

- у кроликов с дисфункцией печени и подвергавшихся ТЭС структура органа преимущественно представлена светлыми гепатоцитами, печёночные дольки сформированы, границы долек хорошо различимы, печёночные балки и синусоидальные капилляры просматриваются на протяжении всей дольки;

- у кроликов, которым ТЭС не проводили, в печени имела место ячеистая структура, встречались микроциркуляторные нарушения, заполнение центральных вен форменными элементами, уменьшение в гепатоцитах гликогена.

5. Гепатокорректорные эффекты ТЭС связаны с биологическим действием эндогенных опиоидных пептидов. При введении антогониста опиоидных пептидов налоксона гепатокорректорное действие электростимуляции снижается. Содержание глюкозы, общего белка, общего билирубина, альбуминов, а также ферментативная активность АлАТ, АсАТ и ЩФ в крови собак с дисфункцией печени не имели достоверных различий с соответствующими показателями, полученными до начала эксперимента.

6. Внутрибрюшинное введение ингибитора энкефалиназ D-фенилаланина усиливает гепатокорректорные эффекты ТЭС. После применения ТЭС в комплексе с D–фенилаланином в крови собак с дисфункцией печени достоверно повышается содержание эритроцитов в среднем - на 0,9*1012/л, глюкозы – на 0,4 ммоль/л, общего белка – на 4,6 г/л и понижается содержание лейкоцитов - на 1,2*109/л, общего билирубина – на 0,7 мкмоль/л, -глобулинов - на 2,2 %, -глобулинов – на 3,9 %, ферментативная активность АлАТ – на 30,5 нмоль/л*с, АсАТ – на 26,1 нмоль/л*с.

5. Практические предложения

Для коррекции функционального состояния печени у собак рекомендуется применение ТЭС в комплексе с D-фенилаланином. С этой целью трижды через день проводят ТЭС, перед каждым сеансом которой внутрибрюшинно вводят

D-фенилаланин в дозе 300 мг/кг. При этом ТЭС используется в режиме, включающем подачу на электроды, расположенные на голове животного, вначале постоянного тока медленно нарастающего от 0 до 3,0 мА, а затем импульсного тока с частотой 70 Гц и длительностью 3,5 мс. Продолжительность сеанса электростимуляции составляет 30 мин.

Полученные результаты экспериментальных исследований могут быть использованы в учебном процессе при преподавании курса физиологии животных на факультетах ветеринарной медицины.

6. Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Аксенов А.А. Гематологические показатели у кроликов при остром отравлении четыреххлористым углеродом / А.А. Аксёнов, Б.С. Сеин // Проблемы сельскохозяйственного производства на современном этапе и пути их решения: Материалы ХI международной научно-производственной конференции.- Белгород, 2007.- С. 217.

2. Сеин О.Б. Экспериментальное изучение эффектов транскраниальной электростимуляции при острой интоксикации кроликов /О.Б. Сеин, А.А. Аксёнов, Б.С. Сеин // Научные проблемы производства продукции животноводства и улучшения её качества: Материалы международной научно-практической конференции.- Брянск, 2007.- С. 465-468.

3. Аксенов А.А. Биохимические компоненты крови у кроликов при острой интоксикации и транскраниальной электростимуляции / А.А. Аксенов // Ветеринарная медицина – теория, практика и обучение: Материалы второй Всероссийской научно-практической конференции.- Санкт-Петербург, 2007.- С. 4-5.

4. Аксенов А.А. Белковый спектр крови при острой интоксикации / А.А. Аксёнов, Б.С. Сеин // Системные исследования в науке и образовании: Сборник научных трудов.- Курск, 2007.- С. 56-57.

5. Аксенов А.А. Влияние транскраниальной электростимуляции на ферментативную активность крови / А.А. Аксенов // Естествознание и гуманизм. Современный мир, природа и человек: Межвузовский сборник научных трудов.- Томск, 2007.- Т. 4.- № 4.- С. 83.

6. Сеин О.Б. О применении транскраниальной электростимуляции при острой интоксикации / О.Б. Сеин, А.А. Аксенов // Трансферт инновационных технологий в животноводстве: Материалы международной конференции.- Орел, 2008.- С. 173-175.

7. Сеин О.Б. О возможности применения транскраниальной электростимуляции в практике ветеринарной медицины /О.Б. Сеин, Б.С. Сеин, А.А. Аксёнов // Актуальные проблемы ветеринарной медицины: Материалы международной научно-практической конференции, посвященной 125–летию образования ветеринарной службы в Курской области.- Курск, 2008.- С. 359-361.

8. Сеин Б.С. Транскраниальная электростимуляция как новый метод воздействия на организм животных / Б.С. Сеин, А.А. Аксёнов // Актуальные проблемы развития животноводства и пути их решения: Материалы Всероссийской научно-практической конференции, посвященной 55-летию образования зооинженерного факультета Курской ГСХА.- Курск, 2008.- С. 133-137.

9. Сеин О.Б. Экспериментально-клиническое изучение возможностей применения транскраниальной электростимуляции в ветеринарии /О.Б. Сеин, М.В. Беседин, С.А. Кизилов, Б.С. Сеин, А.А. Аксёнов, А.В. Найденков // Селекционно–технологические аспекты повышения продуктивности сельскохозяйственных животных в современных условиях аграрного производства: Материалы международной научно-производственной конференции, посвященной 25-летию кафедры частной зоотехнии, технологии производства и переработки продукции животноводства Брянской ГСХА.- Брянск, 2008.- С. 34-36.

10. Аксенов А.А. Содержание аминотрансфераз у кроликов при транскраниальной электростимуляции / А.А. Аксёнов, Б.С. Сеин // Актуальные проблемы повышения эффективности агропромышленного комплекса: Материалы международной научно-практической конференции.- Курск, 2008.- С. 167.

11. Сеин О.Б. Перспективы использования транскраниальной электростимуляции /О.Б. Сеин, Б.С. Сеин, А.А. Аксёнов // Аграрная наука.- 2008.- № 9.- С. 37-38.



 



<
 
2013 www.disus.ru - «Бесплатная научная электронная библиотека»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.