WWW.DISUS.RU

БЕСПЛАТНАЯ НАУЧНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

 

Аутофлора кишечника у пожилых и людей старческого возраста, проживающих в крупном промышленном городе

На правах рукописи


ТОНКУШИНА ЛИЛИЯ ВЛАДИМИРОВНА

Аутофлора кишечника у пожилых и людей старческого возраста, проживающих в крупном промышленном городе

03.00.07 Микробиология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени

кандидата медицинских наук

Волгоград 2009

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Волгоградский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию».

Научный руководитель: доктор медицинских наук,

профессор В.С. Крамарь

Научный консультант: доктор медицинских наук,

профессор С.И. Краюшкин

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук,

профессор Л.Н. Васильева

доктор медицинских наук,

профессор, А.Т. Яковлев

Ведущая организация: Саратовский государственный

медицинский университет.

Защита состоится «____» _____ 2009 года в _____ часов на заседании диссертационного совета Д 208.008.06 по защите докторских и кандидатских диссертаций при Волгоградском государственном медицинском университете по адресу: 400131, г. Волгоград, пл. Павших борцов, д. 1.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО «Волгоградский государственный медицинский университет» (400131, г. Волгоград, пл. Павших борцов, д. 1).

Автореферат разослан «____» ___________ 2009 года.

Ученый секретарь

диссертационного cовета,

доктор социологических наук,

доцент М.Д. Ковалева

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Наличие тенденции к дальнейшему увеличению лиц пожилого и старческого возраста делает борьбу за длительную трудоспособность людей старших возрастных групп и их активное долголетие большой государственной и социально-биологической проблемой (В.М. Берштейн, 2000; Э.В. Карпухин, 2000; А.А. Бутов, 2002; Г.М. Тихонов, 2006; Е.В. Исакова, 2007; V. L. Hazaszthy et al., 2000).

Создаются возможности расширения фактических возрастных границ трудовых ресурсов, что означает сохранение и вовлечение в среду общественного труда дополнительных контингентов работников пожилого возраста (Л.П. Лебедева, 2000; А.Л. Арьев, 2001; Ю.П. Бойко, 2007).

Внимание к геронтологии со стороны учреждений здравоохранения и социального обеспечения приобретают большое значение в решении как индивидуальных, направленного на сохранение физического, психического и социального здоровья пенсионеров, так и в решении задач, связанных с экономикой государства (И.В. Гришаева, 2000; Е.В. Исакова, 2007).

Государство проявляет неустанную заботу о здоровье и продолжительности жизни трудящихся, для чего необходимо познание процессов жизнедеятельности человека (А.Л. Арьев, 2001; В.И. Донцов, 2002; О.В. Краснова, 2002).

С возрастом происходит своеобразное "накопление" болезней, отмечается множественность патологических процессов, а ведь стареющий организм обладает меньшей сопротивляемостью и способностью к компенсации, восстановлению функций после перенесенных заболеваний, операций и травм (Е.Е.Михайлов с соавт., 1995; А.В. Валышев с соавт., 1997; Л.Б.Лазебник с соавт., 1999).

Организм человека населяют примерно 500 видов бактерий, не считая персистирующих вирусов, простейших, а также грибов (А.А. Воробьев, Н.А. Абрамов, В.М.Бондаренко, Б.А. Шендеров, 1997).

Сложившиеся в процессе эволюции микробные биоценозы в разных системах организма человека поддерживают их нормальные физиологические функции.

Микрофлоре принадлежит роль в обмене веществ, синтезе витаминов, детоксикации, формировании естественного иммунитета. Одной из важных функций микрофлоры является ее участие в кооперации с организмом хозяина и обеспечение колонизационной резистентности, защищающей от заражения патогенными микроорганизмами (В.М. Бондаренко, Е.М. Горская, 1992; И.Б. Куваева, К.С. Ладодо, 1991).

Одной из важнейших функций микрофлоры является ее участие в кооперации с организмом хозяина в обеспечении колонизационной резистентности. Говоря о пользе микрофлоры, следует иметь в виду, что ее представители способны выступать и как фактор агрессии (Б.А. Шендеров, 1987, 2005).

Учитывая актуальность и недостаточную изученность данной проблемы целью нашей работы явилось определение особенностей микрофлоры кишечника у лиц пожилого и старческого возраста, проживающих в крупном промышленном городе. Для выполнения этой цели были поставлены следующие задачи:

  1. Оценить аутофлору кишечника у лиц старших возрастных групп.
  2. Провести анализ качественного и количественного состава микрофлоры при дисбактериозе при патологии пищеварительного тракта.
  3. Исследовать фенотипические и генотипические свойства некоторых симбионтов и условно - патогенных микроорганизмов, входящих в состав биоценоза кишечника лиц обследуемых групп.
  4. Оценить функциональное состояние толстой кишки по определению активной кислотности фекалий, содержанию органических кислот, аммиака, муцина и белка в них.
  5. Обосновать биокоррекцию дисбактериоза, учитывая функциональное состояние кишечника.

Научная новизна. На большом клиническом материале проведено углубленное исследование качественного и количественного состава микрофлоры кишечника у жителей пожилого и старческого возраста крупного промышленного города.

Определены основные микробиологические показатели, характеризующие степень выраженности и типы дисбиотических проявлений.

Полученные данные свидетельствуют о качественных изменениях метаболизма типичных эшерихий, выделенных у людей обследуемых групп. Биохимическая активность штаммов E. coli, колонизирующих людей старческого возраста, указывает на увеличение уровня активности ферментов, продуцирующих токсические соединения, с одной стороны, или на увеличение части активных в этом отношении штаммов, с другой.

Обнаружена более интенсивная продукция эшерихиями, колонизирующими кишечник у людей старческого возраста, аспарагиназы ЕС-2.

Практическая значимость работы. Работа проводилась в соответствии с планом научно-исследовательской работы ВолГМУ «Микроэкология человека, проживающего в крупном промышленном городе».

Результаты проведенных исследований дали основание представить уровень и основные закономерности распространения нарушения микроэкологии кишечника у лиц пожилого и старческого возраста.

Обоснована необходимость при диагностике дисбактериоза у лиц старших возрастных групп использовать комплекс лабораторных исследований, направленных на изучение микрофлоры и метаболитов испражнений. Оптимизированы способы коррекции дисбактериоза с использованием пробиотиков и кисломолочных продуктов.

Материалы диссертации внедрены в работу кафедры микробиологии, вирусологии и иммунологии ВолГМУ и кафедры амбулаторной и скорой помощи.

Положения, выносимые на защиту:

  1. Целесообразно при изучении колонизационной резистентности кишечника комбинировать прямые и косвенные методы исследования микрофлоры: на первом этапе нужно использовать косвенные (определение метаболитов), на втором – прямые методы.
  2. Эффективность проводимой биокоррекции основана на феномене временного замещения собственной микрофлоры с целью ее восстановления и нормализации функции.

Апробация работы и публикации. Материалы исследований доложены и обсуждены на 64-й, 65-й, 66-й, 67-й конференциях молодых ученых (2006, 2007, 2008, 2009), 55-й региональной научной конференции (2008).

Основные положения диссертации опубликованы в 9 печатных работах, 2 из которых в журнале ВАК.

Объем и структура работы. Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы, 8 глав собственных исследований, обсуждения результатов и выводов, указателя литературы, включающего 184 источника, в том числе 142 отечественных и 42 зарубежных. Работа изложена на 131 страницах машинописного текста, иллюстрирована 12 рисунками и 25 таблицами.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Объект и методы исследования

Обследовано 501 человек в возрасте от 45 до 89 лет, которые были разделены на 3 группы: 1) пожилые – 180 человек; 2) лица старческого возраста – 214; 3) группа сравнения (107) – лица 45 – 59 лет.

Колонизация макроорганизма оценивалась по результатам изучения биоценоза кишечника.

Микрофлора изучалась по методу Haenel (1973). Культуры, выросшие на питательных средах, подвергались групповой и видовой идентификации. Анализ выделенных микроорганизмов проводили согласно определителю Берджи (1997) по морфологическим, тинкториальным, культуральным, биохимическим (с помощью отечественных мультимикротестов ММТ Е1, ММТ Е2 Lachema тест-систем) и антигенным свойствам.

Анаэробные микроорганизмы культивировали в микроанаэростатах системы GasPak в присутствии палладиевых катализаторов и индикаторных ризазуриновых систем (OXOZD, Англия).

Биологическое типирование аэробных микроорганизмов осуществлялось по биохимическим и антигенным свойствам. При этом идентификацию стафилококков проводили в соответствии с приказом № 691 от 28.12.89 г. и методическими рекомендациями А.К. Акатова с соавт. (1998), условно-патогенных энтеробактерий – с использованием детерминированного хромосомными генами ферментативного профиля (И.В. Смирнов, 2001). Фенотипическую идентификацию проводили машинными системами с применением цифрового кодирования признаков.

Скрининг штаммов условно-патогенных микроорганизмов на наличие плазмидной ДНК проводили, используя общепринятые методики (Т. Маниатис с соавт., 1984). Хромосомную ДНК выделяли модифицированным методом, предложенным J. Marmur (1999).

Оценка микрофлоры и степень тяжести дисбактериоза осуществлялась по Отраслевому стандарту «Протокол ведения больных с дисбактериозом кишечника» (2003).

Все материалы были подвергнуты статистической обработке. Вычисления проводились в среде пакета STATISTICA 5,0, а также с использованием программы статистического и инженерного анализа MS Excel 97. Регрессионный анализ заключался в определении степени линейной регрессионной зависимости, при этом приводились только достоверные значения коэффициентов и параметров зависимостей. Различия между величинами считались достоверными при р<0,05 (В.И. Крутов, В.В. Попов, 1989; В.К. Юрьев, 1993).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Выполняя поставленные задачи, обследована микрофлора лиц пожилого и старческого возраста. Группой сравнения были лица среднего возраста.

Среди обследуемых как первой, так и второй группы преобладали пациенты женского пола (54,0 и 56,1% соответственно).

В структуре госпитальной заболеваемости пациентов на первом месте была патология органов кровообращения – (44,8%), на втором –цереброваскулярная патология (15,7%). Третье место занимали болезни органов пищеварения (10,1%), далее – органов дыхания (9,2%).

В целом на одного пожилого пациента приходилось 7,5 видов патологии, старше 75 лет - более 8,5.

Клинический статус обследованных представлен в табл. 1.

Таблица 1

Клинический статус обследованных

Класс болезней Группа обследованных M±m
60–74 года 75-89 лет
Органы кровообращения 45,1 44,3 44,8±0,12
Цереброваскулярная патология 14,7 18,0 15,7±0,10
Органы пищеварения 10,4 9,5 10,1±0,10
Органы дыхания 8,8 8,6 9,2±0,11
Органы опорно - двигательного аппарата 6,0 5,2 5,6±0,14
Эндокринная система 7,1 5,6 7,3±0,12
Прочие болезни 7,9 8,7 7,3±0,15
Всего 100 100 100±0,84

Учитывая цель исследования наблюдаемые пожилого и старческого возраста были распределены на 2 группы: 1) лица, страдающие заболеваниями пищеварительной системы (176); 2) наблюдаемые с отсутствием патологии пищеварительного тракта (218).

Во всех группах обследуемых наиболее значимыми функциональными нарушениями пищеварения было снижение аппетита (28,05%), урчание в кишечнике (22,2%), метеоризм, наличие которого отмечали 58 человек (15,8%), запоры (16,2%), поносы (15,8%).

Среди жалоб обследованных значительное место занимали указания на нарушение стула, при этом у людей старческого возраста в среднем акт дефекации осуществлялся редко (раз в 3,5±0,5 дня); среди пожилых пациентов у 49 (27,2%) был 1 раз в сутки, у 34 (18,9%) – 2 раза и у 31 (17,2%) обследованных – 3 и более раза в сутки.

Проявления болевого симптома в животе различной интенсивности и локализации отмечались всеми обследованными (100,0%).

При этом у обследованных старческого возраста боли преимущественно отмечались в правой (34,0%) и левой (21,0%) подвздошной областях, у пожилых - 40,0 и 30,0% соответственно. При их объективном осмотре общее состояние не было нарушенным. Живот был несколько вздут, умеренно болезнен по всей поверхности.

У пациентов старше 75 лет отмечались также нарушения психоэмоционального статуса, проявляющиеся тревожным настроением (21), склонностью к пессимизму (16), раздражительностью (33).

Проведенные нами исследования микрофлоры фекалий людей различных возрастных групп выявили нарастание общего количества аэробов с возрастом (табл. 2).

Уменьшилось с возрастом число положительных высевов и количество лактобацилл (4,0108; 2,3107; 6,7105 в 1 г фекалий). В старческом возрасте отмечалось снижение числа высевов и количества в 1 г фекалий бифидобактерий (1,01010; 6,8106 и 5,0105 КОЕ).

Выявлен факт постоянного количественного соотношения E. coli и B. bifidum наблюдаемого у группы сравнения и измененного обратно пропорционально в группе пожилого и старческого возраста.

Таблица 2

Состав микрофлоры фекалий людей 3-х возрастных групп

Изучаемые микроорганизмы Возрастная группа и число проб в каждой
45-59 лет (n=107) 60 лет-74 года (n=74) 75-89 лет (n=144)
число положи-тельных высевов частота обнару-жения (%) количество микробов в 1 г фекалий (М±m) КОЕ/г число положи-тельных высевов частота обнару-жения (%) количество микробов в 1 г фекалий (М±m) КОЕ/г число положи- тельных высевов частота обнару-жения (%) количество микробов в 1 г фекалий (М±m) КОЕ/г
Бактероиды 75 70,0 8,0·1010 ± 0,3 64 86,5 1,0·109 ± 0,14 119 82,6 1,0·1010 ± 0,11
Бифидобактерии 107 100,0 1,0·109 ± 0,3 63 85,1 6,8·106 ± 0,04 97 67,4 5,0·106 ± 0,05
Лактобациллы 107 100,0 4,0·108 ± 0,2 70 94,6 2,3·107 ± 0,22 103 71,5 6,7·105 ± 0,11
Эшерихии 107 100,0 8,0·107 ± 0,3 74 100,0 4,3·107 ± 0,01 144 100,0 9,4·106 ± 0,03
Стрептококки 20 18,7 1,6·104 ± 0,1 28 37,8 8,9·105 ± 0,1 65 45,1 3,4·105 ± 0,01
Стафилококки 21 19,6 9,0·103 ± 0,1 47 59,7 1,9·104 ± 0,06 86 63,5 6,8·105 ± 0,11
Энтерококки 20 18,7 6,0·104 ± 0,4 23 31,1 6,4·105 ± 0,09 33 22,9 9,4·105 ± 0,1
Энтеробактерии (суммарно) 22 20,6 9,0·103 ± 0,5 18 24,3 9,7·104 ± 0,23 38 26,4 9,9·105 ± 0,17
Спороносные анаэробные палочки 12 11,2 1,8·103 ± 0,02 15 20,3 6,5·103 ± 0,07 30 20,8 2,7·104 ± 0,05
Кандиды 28 26,2 2,0·103 ± 0,7 20 27,0 1,0·103 ± 0,16 34 28,0 8,7·103 ± 0,06
Протей 7 6,5 6,0·102 ± 0,1 5 6,8 3,0·103 ± 0,28 37 25,7 4,3·104 ± 0,05
Цитробактер 4 3,7 5,0·104 ± 0,3 5 6,8 5,3·105 ± 0,13 16 11,1 6,0·105 ± 0,11
Клебсиеллы 6 5,6 2,0·103 ± 0,1 65 87,8 3,4·104 ± 0,21 121 89,6 4,1·105 ± 0,11
Энтеробактер 3 2,8 4,0·103 ± 0,2 24 32,4 4,4·104 ± 0,1 51 35,4 4,9·105 ± 0,12

Анализ аэробной флоры показал, что в биоценозе лиц старческого возраста наряду с полноценными эшерихиями встречались лактозонегативные и гемолитические штаммы. С возрастом их частота высева увеличивалась составляя 30,2% и 35% - у лиц пожилого и 40,3 и 45,1% в старческом возрасте.

Наиболее часто дрожжеподобные грибы регистрировались в фекалиях лиц старческого возраста (28,0%). Обсемененность ими фекалий лиц среднего возраста составляла 2 ·103 ± 0,3, старческого – 8,7 · 103 ± 0,03 КОЕ/г.

Обнаружение протея увеличивалось также с возрастом (6,0; 6,8; 25,7 %). Количество его также достоверно возрастало (6 · 103 ; 3 · 103 ; 4,3 · 104 КОЕ/г соответственно).

Стрептококки высевались из фекалий людей всех возрастных групп (45 - 59 лет – в 18,7%, у пожилых людей – 37,8%, старческой группе – в 45,1%).

Значительное количество в биоценозе лиц пожилого и старческого возраста занимали стафилококки (26,1% и 63,5% соответственно), тогда как у людей 45-59 лет эти микроорганизмы выделялись у меньшего числа лиц (19,6%). В количественном отношении в кишечном содержимом группы сравнения стафилококков было значительно меньше, чем в старших возрастных группах (9 · 103 ±0,08 и 1,9 · 104 ±0,06, 6,8 · 105 ± 0,11 КОЕ/г).

Наблюдаемые колебания в содержании и частоте высевов протея, дрожжей, спороносных анаэробных палочек косвенно свидетельствуют об имеющихся в старческом возрасте неблагоприятных сдвигах в микробиоценозе толстой кишки.

Анализируя биоценоз при нарушениях функции органов пищеварения, нами обращено внимание на УПМ, играющих роль возможного этиологического агента (табл. 3). Из испражнений 104 (81,9%) лиц в возрасте от 60 лет были высеяны условно-патогенные микроорганизмы. При этом зарегистрировано, что одновидовой дисбактериоз встречался у 57 из них, что составляет 54,8%. Из моновидовых наиболее часто диагностировали кандидозный – 18 (17,3%), протейный – 12 (11,5%) и стафилококковый дисбактериоз – 10 (9,6%). Менее часто в биоценозе встречались клебсиеллы (8; 14,03%), энтеробактеры (6; 10,5%), цитробактеры (3; 5,3%).

Таблица 3

Микрофлора людей пожилого и старческого возраста с патологией

кишечника, КОЕ/г

Группа Обсемененность, M±m, КОЕ/г
Бифидобактерии Лактобактерии Эшерихии УПЭБ Стафилококки Грибы
I 5,1106±0,18 8,1105±0,35 7,0109±0,12 8,0106±0,15 8,8105±0,33 7,1105±0,36
П 4,3106±0,21 7,8104±0,22 1109±0,13 9,1106±0,37 8,9104±0,43 9,0105±0,46
Ш 9,5104±0,20 6,2104±0,34 3,7109±0,20 1,1107±0,43 7,0 105±0,15 1,1106±0,40

При патологии органов пищеварения, несмотря на полиэтиологичность нарушений микроэкологии кишечника, клинические проявления были неспецифичны, что не представляло возможности выделить ведущий симптом. В биоценозе микрофлора характеризовалась снижением количественного содержания индигенной анаэробной микрофлоры (лакто- и бифидобактерий), повышении содержания типичных кишечных эшерихий, а также условно-патогенных микроорганизмов.

Установлено, что наиболее глубокие нарушения со стороны микроэкосистемы выявлены при энтероколите, для которого в большей степени характерен протеоз. Стафилококковый дисбактериоз, как правило, был связан с патологией желчно-билиарной системы.

В процессе жизнедеятельности микроорганизмы, заселяя ту или иную экологическую нишу, выделяют ферменты, которые осуществляют одновременно несколько функций: инициируют, выполняют и завершают метаболические процессы, обеспечивая себя нужными веществами, отсутствующими в среде их обитания, разлагая имеющиеся и синтезируя из них недостающие.

Энзимы защищают бактериальную клетку как от вредных экологических воздействий, так и от защитных факторов макроорганизма. Кроме того, микроорганизмы обладают рядом ферментов «агрессии», способствующих при определенных условиях развитию инфекционного процесса.

В этой связи для анализа функциональной метаболической активности бактерий, колонизирующих кишечник людей различных возрастных групп, проанализированы биологические свойства некоторых симбионтов и условно-патогенных микроорганизмов.

Результаты определения биохимических свойств эшерихий были сопоставлены с общей характеристикой стандартного штамма E. coli М17. Нами взята за основу биологического типирования изучаемых бактерий система идентификации СУЛГ с последующим изучением вариантов. Изучение биохимических свойств эшерихий дало основание выделить 15 биоваров эшерихий, циркулирующих у людей обследуемых групп.

Проведенные исследования свидетельствуют, что на территории Волгограда циркулируют эшерихии преимущественно 13, 14 и 15 биологических вариантов. У людей по мере старения изменяется биологический профиль нормального симбионта – эшерихий за счет снижения метаболической активности.

Далее представлялось интересным изучение и анализ эшерихий на наличие биогенных аминов, которые поступали в кишечник в результате декарбоксилирования и дезаминирования субстрата.

Обнаружена у микроорганизмов способность декарбоксилировать глутаминовую кислоту с достаточно выраженной активностью. Достоверно показано снижение глутаматдекарбоксилазы штаммов E. coli, выделенных у людей старческого возраста, что указывает на уменьшение поступления ГАМК в кровь, и может являться дополнительным патогенетическим механизмом повышения АД у этого контингента лиц.

Число штаммов E. coli обладающих аргининдекарбоксилазой, возрастало от 85% в средней возрастной группе до 98% в старческой. Средний уровень активности аргининдекарбоксилазы у штаммов кишечной палочки, выделенных у лиц старческого возраста, ниже по сравнению с таковым у культур от людей средней возрастной группы.

В результате проведенных исследований выявлено статистически достоверное увеличение активности лизиндеарбоксилазы у штаммов, выделенных от людей III-ей возрастной группы, при сравнении со II-ой группой (р=0,99), с I-ой (р=0,88).

Таким образом, установлена тенденция увеличения числа штаммов E. coli, обладающих декарбоксилазами аминокислот, в фекалиях лиц старческого возраста. При этом средний уровень активности глутамат- и аргининдекарбоксилаз снижался, а лизиндекарбоксилазы повышался. Отмечено возрастание уровня активности ферментов у штаммов E.coli, выделенных от лиц среднего возраста при одновременно уменьшающемся диапазоне колебаний.

При дезаминировании аспарагиновой, глутаминовой кислот и их амидов кишечная палочка способна продуцировать аммиак. Число штаммов E. coli, выделенных от первых двух возрастных групп, обладающих глутаматдезаминазной активностью, оказалось сравнительно небольшим. Большинство культур, обнаруженных у людей старческого возраста, проявляли выраженную активность дезаминировать глутаминовую кислоту. Уровень их активности (0,069±0,002 МЕ) достоверно был выше, чем таковой в группе лиц среднего возраста (р=0,99).

Аспартазная активность имела место практически у всех штаммов, выделенных у людей 75-89 лет (98%). В первых двух возрастных группах активность фермента обнаруживалась примерно у одинакового числа штаммов: среди культур, выделенных у людей I –ой возрастной группы, число активных составляло 26 из 48 исследованных (54,2%), во II-ой -19 активных из 47 исследованных (40,4%).

Наиболее высокий уровень средней величины активности фермента наблюдался у эшерихий, выделенных у людей среднего возраста, –0,145±0,42 МЕ; у пожилых и старческого возраста – 0,07±0,01 и 0,069±0,01 МЕ соответственно.

Среди штаммов, выделенных у людей старческого возраста, число активных штаммов, дезаминирующих глутаминовую кислоту, значительно возрастало. Отсутствие способности дезаминировать глутаминовую кислоту у штаммов E.coli, выделенных от людей среднего возраста, сопровождалось одновременно повышением уровня аспартазной активности.

Наиболее постоянно у исследованных штаммов кишечной палочки определялась аспарагиназная активность. При этом фермент обнаружен у всех штаммов, выделенных от лиц старческого возраста.

Таким образом, при колебаниях в уровне активности аспарагиназы и глутамазы от штамма к штамму E.coli, выделенных от лиц трех возрастных групп, число таковых значительно увеличивалось у лиц старческого возраста.

Индуцибельность ферментов характерна для бактериальных клеток, и, следовательно, метаболизм их определяется, главным образом, теми условиями, в которых приходится существовать микроорганизмам, населяющим кишечник.

Анализ полученных данных показал достоверное повышение кислотности кишечного содержимого у людей старческого возраста (р>0,99), что создает условия для усиления декарбоксилазной активности микрофлоры.

Повышение кислотности фекалий у людей может определяться содержанием органических кислот этого метаболита.

Высокие цифры содержания органических кислот в фекалиях лиц среднего и старческого возраста указывали на выраженность процессов брожения в толстой кишке, что может влиять на поддержание воспалительных процессов слизистой оболочки.

Выявленные у обследуемых параллельно идущие процессы повышения содержания органических кислот и аммиака влияют на микроэкологические условия в толстой кишке, изменяют характер жизнедеятельности микрофлоры.

При плазмидном скрининге S. aureus, E. coli и K. pneumonia внехромосомные ДНК различного размера обнаружены в штаммах кишечной палочки и K. pneumonia. Однако во всех исследуемых культурах плазмиды имели различную электрофоретическую подвижность. При рестрикционном анализе выделенные плазмиды имели различный спектр фрагментов ДНК. Ни в одном штамме не выявлено идентичных плазмид. Все анализируемые золотистые стафилококки оказались бесплазмидными.

Установлено отсутствие прямых коррелятивных связей между генотипами анализируемых штаммов исследуемых видов микроорганизмов. При ПЦР - типировании, независимо от группы обследуемых генотипические особенности штаммов свидетельствовали об их уникальности.

Можно предположить, что у каждого из обследуемых индивидуумов был отличающийся по генотипическим признакам микробный пейзаж.

Исследуя биоценоз пищеварительного тракта у лиц старших возрастных групп, мы пришли к заключению, что изучение микрофлоры должно быть продиктовано не только желанием уточнить состав флоры, а в совокупности с анализом метаболитов кишечника, побудительной мотивацией для деятельности врача при лечении данных больных.

В этой связи коррекция микробиоценоза кишечника у лиц пожилого и старческого возраста является приоритетным направлением, обеспечивающим протективный эффект в отношении роста условно-патогенных энтеробактерий и стойких глубоких нарушений микробиоценоза кишечника.

Очень важным обстоятельством при этом был выбор препарата. Целесообразным в качестве основополагающего критерия, кроме микрофлоры, использовать показатели функционального состояния кишечника.

Основываясь на данных клинической копрологии и изменениях микробиоценоза кишечника было отобрано 165 человек пожилого и старческого возраста. Первую группу составили люди (55) с расстройством двигательной активности в виде запора, которым был назначен биопрепарат «Наринэ» (лиофилизированная биомасса молочно-кислых бактерий Lactobacillus acidophilus EP 317/402). Вторая группа объединила пожилых людей с дисбактериозом кишечника и выраженными расстройствами кишечника в виде диареи (55 человек), принимавших для биокоррекции «Энтерол». В состав 3 группы вошло 55 пожилых людей с неустойчивым стулом, прошедших курс «Бифидумбактерин».

После курса проведенной терапии биопрепаратом «Наринэ» у наблюдаемых первой группы (100%) нами были отмечены положительные сдвиги в микрофлоре кишечника. При этом максимальные значения показателей колонизации как для лакто-, так и для бифидобактерий были установлены именно в первой группе пожилых людей.

На фоне лечения эубиотическими препаратами нами были отмечены положительные сдвиги в аэробном компоненте микрофлоры.

Анализируя полученные данные установлено, что при использовании «Наринэ» количество условно-патогенных энтеробактерий уменьшилось в 2 раза (32,3% до 13,6%), что сопровождалось достоверным уменьшением плотности колонизации на 1-3 порядка логарифма.

Данные лечения пожилых людей (вторая группа), получавших «Энтерол», показали восстановление бифидофлоры, произошедшее у 89,1% обследуемых, а лактофлоры – у 53 (96,4%) человек.

Исследования, проведенные после окончания курса биокоррекции (30 дней), свидетельствуют, что у 53 человек (96,4%) произошла полная нормализация микробиоценоза кишечника, что позволило нам отметить хороший терапевтический эффект применения препарата «Энтерол» в лечении больных дисбактериозом кишечника, который превосходил таковой в группе сравнения, что, вероятнее всего, может быть связано с заместительной ферментативной активностью живой высокоактивной культуры эшерихий, коррегирующей синдром мальабсорбции, связанный с дефицитом эндогенной лактазы, имеющим место у больных дисбактериозом кишечника.

В третьей группе обследуемых после проведенного курса лечения бифидумбактерином и колибактерином частота обнаружения энтеробактерий уменьшилось в 9 раз и составила 9,3%. Наибольший элиминирующий эффект отмечался в отношении условно-патогенных энтеробактерий.

Полученные данные дают основание отметить хороший терапевтический эффект применения кисломолочной смеси «Наринэ» в лечении больных дисбактериозом кишечника, который превосходил таковой в группах сравнения, что, вероятнее всего, может быть связано с заместительной ферментативной активностью живой высокоактивной культуры лактобактерий, вырабатывающей лактозу и коррегирующей синдром мальабсорбции, связанный с дефицитом эндогенной лактазы, имеющей место у больных дисбактериозом кишечника.

Включение в диетотерапию пожилых людей, страдающих различными функциональными расстройствами кишечника изученных пробиотиков, дает протективный эффект в отношении роста условно-патогенных бактерий, что в целом, нормализует или улучшает показатели микробиоценоза кишечника, способствует исчезновению клинических проявлений дисбактериоза кишечника.

При этом очень важно подчеркнуть, что тестами контроля и основополагающими критериями выбора пробиотика являются те функциональные расстройства, которые легли в основу поиска нарушенного микробного спектра, и характер дисбактериоза. Этими двумя тестами следует руководствоваться при выборе препарата, дозы и продолжительности использования. Нужно помнить, что основным свойством функциональной системы является саморегуляция. Кроме того, изученные пробиотики хорошо переносятся пожилыми пациентами и финансово доступны большинству из них, что позволяет рекомендовать данные препараты для профилактики и лечебной коррекции микробиоценоза кишечника людям пожилого и старческого возраста в зависимости от индивидуальных особенностей имеющихся функциональных расстройств.

ВЫВОДЫ

  1. Микробиоценоз кишечника жителей г. Волгограда характеризуется относительным постоянством. При старении наблюдаются явления возрастного дисбактериоза, характеризующегося количественным и качественным изменением микрофлоры толстой кишки, обусловленные уменьшением высева лакто- и бифидобактерий, а у лиц старческого возраста и бактероидов, увеличением количества и частоты встречаемости условно-патогенных бактерий.

2. Выявлена тенденция к увеличению штаммов E. coli, обладающих декарбоксилазами глутаминовой кислоты, аргинина, лизина у людей старше 75 лет. При этом средний уровень активности глутамат- и аргининдекарбоксилаз снижался, а лизиндекарбоксилаз повышался. У штаммов, выделенных у лиц старческого возраста, число способных дезаминировать аспарагиновую кислоту и их амиды возрастало, что, соответственно, ведет к увеличению продукции аммиака в кишечнике.

3. Наблюдается возрастное снижение кислотности кишечного содержимого с превалированием процессов гниения.

4. Данные экспериментальных исследований показали, что репродуктивная активность эшерихий, как представителей нормоценоза кишечника человека, выделенных у лиц старших возрастных групп, обладают более низкой кинетикой роста, чем таковые группы сравнения. Совместное культивирование E.coli с УПМ выявили снижение антагонистической активности эшерихий, что проявлялось укорочением Lag- фазы у совместно культивируемых УПМ.

5. Кластерный анализ микроорганизмов (эшерихий и УПБ) и плазмидный спектр по результатам ПЦР – типирования свидетельствуют о высокой полиморфности в каждой группе обследуемых штаммов циркулирующих среди обследуемых различных возрастных групп

6. Обоснована коррекция дисбактериоза у лиц пожилого возраста с использованием пробиотиков и кисломолочных продуктов, обогащенных биокультурами, при этом необходимо учитывать микробиологические и копрологические показатели конкретного дисбиотического состояния.

СПИСОК ПЕЧАТНЫХ РАБОТ,

ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

  1. Тонкушина Л.В. Колонизационная резистентность пищеварительного тракта у лиц преклонного и старческого возраста / Тонкушина Л. В., Чижикова Т.В. // Актуальные проблемы экспериментальной и клинической медицины: материалы 64-й открытой итоговой научной конференции молодых ученых и студентов ВолГМУ. – Волгоград, 2006. – С. 127-128.
  2. Тонкушина Л.В. Аутофлора кишечника людей пожилого и старческого возраста города Волгограда // Естествознание и гуманизм: сборник научных работ.- Т. 3, № 4. – Томск, 2006. – С. 89.
  3. Тонкушина Л.В. Колонизация Staphylococcus aureus лиц пожилого и старческого возраста города Волгограда // Вестник РГМУ. Журнал российского государственного медицинского университета. Материалы II Международной (ХI Всероссийской) Пироговской студенческой научной медицинской конференции. №2 (55) Москва, 15 марта 2007. - С. 318-319.
  4. Тонкушина Л.В. Колонизация энтеробактериями у лиц пожилого и старческого возраста // Естествознание и гуманизм: межвузовский сборник научных работ. Современный мир, природа и человек.- Т. 4, № 3. – Томск, 2007. – С.89-90.
  5. Тонкушина Л.В.Микрофлора кишечника людей различных возрастных групп / Тонкушина Л.В., Спирюкова У.А., Михайлова Л.В. // Материалы 66-й открытой научно-практической конференции молодых ученых и студентов с международным участием «Актуальные проблемы экспериментальной и клинической медицины», 23-25 апреля 2008 г.- Волгоград, 2008. – С. 145-146.

6. Тонкушина Л.В. Дезаминирование дикарбоновых кислот и их амидов у штаммов Е.coli, выделенных у здоровых людей / Тонкушина Л.В., Спирюкова У.А., Михайлова Л.В. // Проблемы и перспективы современной науки. Сборник научных трудов. – Вып. 1.- Томск, 2008.- С. 85.

7. Тонкушина Л.В. Эшерихии в биоценозе кишечника людей, живущих в крупном промышленном городе / Тонкушина Л.В., Крамарь В.С., Спирюкова У.А. // 55-я юбилейная региональная научная конференция профессорско - преподавательского коллектива Волгоградского государственного медицинского университета. Современная инновационная медицина – населению Волгоградской области.- Волгоград, 2008. – С.65-67.

8. Тонкушина Л.В. Резидентное стафилококковое бактерионосительство в популяции человека живущего в крупном промышленном городе / Тонкушина Л.В., Крамарь В.С., Покателов А.А. // Вестник новых медицинских технологий. – Т ХVI, №1 - г. Тула, 2009. – С. 24-25.

9. Тонкушина Л.В. Биокоррекция нарушений микроэкологии кишечника у лиц пожилого и старческого возраста / Тонкушина Л.В., Крамарь В.О. // Проблемы и перспективы современной науки. Сборник научных трудов. – Вып. 3.- Томск, 2009.- С. 85-87.



 



<
 
2013 www.disus.ru - «Бесплатная научная электронная библиотека»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.